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賽默飛QuantStudio1實時熒光定量PCR（qPCR）儀支持多種熒光檢測方法，其核心原理基于染料法（如SYBR Green）和探針法（如TaqMan），通過熒光信號的變化實時監(jiān)測PCR擴增過程，從而實現(xiàn)對目標核酸的定量分析。以下是其試劑和染料的工作原理：
一、染料法（SYBR Green）
1、原理：
SYBR Green是一種可嵌入DNA雙鏈小溝的熒光染料，在游離狀態(tài)下幾乎不發(fā)光，但一旦與雙鏈DNA（dsDNA）結合，熒光信號增強約1000倍。
2、特點：
優(yōu)點：成本低，適用于任何PCR產物（無需特異性探針）。
缺點：會結合所有雙鏈DNA（包括引物二聚體和非特異性產物），需通過熔解曲線分析（HRM）驗證擴增特異性。
3、QuantStudio1適配性：
已校準支持FAM/SYBR Green I通道（激發(fā)/發(fā)射波長：~497/520 nm）。
二、探針法（TaqMan）
1、原理：
TaqMan探針是一種寡核苷酸，5′端標記報告熒光基團（如FAM、VIC），3′端標記淬滅基團（如TAMRA）。
當探針完整時，熒光基團的信號被淬滅基團吸收；PCR擴增時，Taq DNA聚合酶的5′→3′外切酶活性切割探針，使熒光基團與淬滅基團分離，釋放熒光信號。
2、特點：
優(yōu)點：特異性高（僅靶序列擴增時產生信號），支持多重檢測（不同探針標記不同熒光基團）。
缺點：探針合成成本較高。
3、QuantStudio1適配性：
支持FAM、VIC、ROX等熒光通道，可同時檢測3種靶標（如FAM/VIC/ROX三通道檢測）。
三、被動參照染料（ROX校正）
作用：
ROX是一種不與DNA結合的熒光染料，用于校正孔間差異（如加樣誤差、耗材透光度差異）。
QuantStudio1內置ROX校準功能，提高數(shù)據(jù)準確性。
四、熒光檢測系統(tǒng)
QuantStudio1采用：
白光LED光源（寬光譜激發(fā)）和 CMOS成像系統(tǒng)，實現(xiàn)96孔同步檢測，避免逐孔掃描的時間誤差。
濾光片配置：FAM、VIC、ROX三通道，覆蓋常見熒光染料需求。
五、總結
QuantStudio1通過染料法和探針法實現(xiàn)高靈敏度（可檢測1.5倍差異）和多重檢測（3通道），結合ROX校正和同步成像技術，確保數(shù)據(jù)精準可靠。用戶可根據(jù)實驗需求選擇SYBR Green（經濟通用）或TaqMan探針（高特異性多重檢測）。
