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技術(shù)文章

thermo賽默飛miniamp普通PCR系統(tǒng)做實(shí)驗(yàn)常用的染料有哪些?

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在MiniAmp PCR實(shí)驗(yàn)(通常指小規(guī)?;蚋咄縋CR體系)中,常用的染料主要分為?核酸凝膠電泳染料?和?實(shí)時(shí)熒光定量PCR染料?兩大類,其選擇需兼顧靈敏度和安全性。以下是具體分類及特性:


一、核酸凝膠電泳染色染料(用于PCR產(chǎn)物檢測(cè))

用于瓊脂糖凝膠電泳中DNA條帶的可視化:


1、SYBR系列(如SYBR Green I)

與雙鏈DNA特異性結(jié)合后熒光增強(qiáng),靈敏度高;

需注意高濃度可能抑制PCR反應(yīng)。


EvaGreen

飽和型染料,可在高濃度下使用而不抑制擴(kuò)增,適合高精度定量和熔解曲線分析。

GoldView

低毒性替代EB的染料,激發(fā)后呈綠色熒光

溴化乙錠(EB)

經(jīng)典染料,但具強(qiáng)致癌性,操作需嚴(yán)格防護(hù),逐漸被淘汰。


二、實(shí)時(shí)熒光定量PCR染料(qPCR)

用于監(jiān)測(cè)PCR擴(kuò)增過(guò)程的熒光信號(hào)累積:

1、SYBR Green I

原理:嵌入DNA雙鏈小溝,熒光信號(hào)強(qiáng)度與產(chǎn)物量正相關(guān);

優(yōu)點(diǎn):通用性強(qiáng)、成本低;

缺點(diǎn):易受引物二聚體干擾,需熔解曲線驗(yàn)證特異性。

2、TaqMan探針

原理:5'端熒光基團(tuán)與3'端淬滅基團(tuán)分離后發(fā)光,特異性高。

優(yōu)勢(shì):適用于SNP檢測(cè)及多重PCR,背景噪音低。

3、分子信標(biāo)(Molecular Beacons)

莖環(huán)結(jié)構(gòu)探針,靶序列結(jié)合后發(fā)熒光,適合突變檢測(cè)。


三、特殊場(chǎng)景染料

1、嵌合型染料(如Syto82、Syto9)對(duì)擴(kuò)增抑制小,靈敏度高。

2、比色染料(如HNB)通過(guò)顏色變化判斷結(jié)果,無(wú)需儀器。


四、總結(jié)

1、泳檢測(cè):推薦SYBR Safe或GoldView(安全性高)。

2、qPCR檢測(cè):SYBR Green I(經(jīng)濟(jì)通用)或EvaGreen(高穩(wěn)定性)。

3、特殊應(yīng)用:CF®染料適用于熒光標(biāo)記探針合成。

TEL:18016231680

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